近年来，随着普洱茶及普洱茶文化的不断发展，品饮、收藏普洱茶正成为茶界的一股新潮流。普洱茶热在全国掀起，不仅仅因为它具有升值潜力，更重要的是因为它对人体具有突出的保健功效。
国内外专家学者采用现代医学生物学方法对普洱茶生理、药理功能进行了深入的研究，不断证实了普洱茶具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、保护非酒精性脂肪肝等多种功效，因此普洱茶也被称之为“减肥茶”和“美容茶”[1-5]。同时，一些公众媒体出现了有关饮用普洱茶易影响动物机体对钙离子的吸收和代谢，造成钙流失，从而妨碍骨骼的生长发育，出现骨质疏松症等相关报道。然而这些报道均没有具体的试验支撑，缺乏一定的科学依据。
针对这一情况，本实验以普洱生茶、熟茶及绿茶为原料，雄性Wistar大鼠为实验动物，通过检测大鼠骨钙和骨磷的含量，以及股骨密度等骨骼生长变化指标，初步了解普洱茶对实验动物骨骼生长及骨密度的影响，为消费者健康饮用普洱茶提供参考。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1普洱茶样品
普洱茶生茶和普洱茶熟茶（年）：云南云县天龙生态茶业有限责任公司生产（产品标准号：DB53/—）；云南省农业科学院茶叶研究所，西双版纳普洱茶研究院（产品标准代号：DB53/）；云南省思茅茶树良种场，中国普洱茶研究院（产品标准代号：DB53/），3种茶样按熟茶、生茶等量混合而成。
曲茗绿茶由云南省思茅茶树良种场提供。
1.1.2主要仪器与试剂
PRODTGYADVANCE双能X线骨密度仪（美国GE公司）；PS-4型电感耦合等离子原子发射光谱仪（美国贝尔德公司）；RE-旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；HR/06/BC飞利浦搅拌机（珠海经济特区飞利浦家庭电器有限公司）。
1.1.3试验动物
只Wistar雄性大鼠（60~75g）：由上海西普尔—必凯实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK（沪）~。
1.1.4基础饲料
由昆明医学院动物实验中心提供。
1.1.5实验动物饮用水
云南山泉纯净水由云南大山饮品有限公司提供。
1.2试验方法
1.2.1茶汤制备
普洱茶和绿茶磨碎后做水浸液提取，制备方法参考文献[2]，提取的茶汤最终质量浓度为1g/mL，4℃冰箱保存。
1.2.2动物分组与处理
健康雄性Wistar大鼠只，同室单笼饲养，自由采食和饮水，环境温度控制在（20±2）℃，湿度45%~60%。实验大鼠在实验环境下喂饲基础饲料适应1周后，根据体重随机分为对照组，普洱熟茶低、中、高剂量组和普洱生茶低、中、高剂量组，及绿茶低、中、高剂量组，每组10只。低、中、高剂量分别为0.5、1.0、2.0g/kg（体重），一次经口灌胃2mL/d，空白对照组灌胃等体积纯净水，连续灌胃90d。每周定时测量试验大鼠的体重、体长（体长测定从大鼠鼻端到肛门）、饮水量和摄食量。
1.2.3受试动物测定指标及方法
⑴体重的测定：每周定时称量。⑵骨钙、骨磷的测定：采用PS-4型电感耦合等离子原子发射光谱仪进行测定。
⑶骨密度的测定：采用PRODTGYADVANCE双能X线骨密度仪测量股骨中点及股骨远心端的骨密度[6]。
1.3数据处理
各处理组数据以平均值±标准误差表示，并采用SPSS11.5软件进行方差分析。
2结果与分析
2.1对雄性Wistar大鼠日摄食量和日饮水量的影响
表1显示，与对照组相比，各实验组日饮水量无显著差异（P0.05），说明灌胃普洱茶及绿茶不影响试验动物的饮水量；除中剂量熟茶组摄食量显著高于对照组（P0.05），高剂量绿茶组摄食量显著低于对照组（P0.05）外，其他试验组与对照组相比日摄食量无显著差异（P0.05），说明普洱茶和绿茶对试验动物的日摄食量影响不大。
2.2对雄性Wistar大鼠体重的影响
由表2可知，各组试验动物初始体重均无显著性差异（P0.05），说明试验干预前各实验动物初始体重处于同一水平。经过90d的灌胃后，高剂量的普洱生茶组、熟茶组和中、高剂量绿茶组大鼠体重显著低于对照组（P0.05）。
2.3对雄性Wistar大鼠骨钙和骨磷含量的影响
由表3可知，各茶组试验大鼠骨钙含量均高于对照组，且高剂量生茶、绿茶组和低、中剂量熟茶组与对照相比具有显著差异（P0.05）；各实验组大鼠骨磷含量均显著高于对照组（P0.05），说明本试验中的普洱茶和绿茶不会降低试验大鼠骨钙和骨磷的含量。
2.4对雄性Wistar大鼠骨密度的影响
由表4可知，各试验组大鼠股骨中点股密度和股骨远心端股密度与对照组相比均无显著性差异（P0.05），说明试验用普洱茶和绿茶对试验大鼠的骨密度均无影响。
3讨论
在整个试验过程中，制备茶汤用水、饲养饮水均为同一厂家纯净水。灌胃时，对照组灌胃同体积纯净水（与受试物的灌胃量比较），保证了各实验大鼠饮用水和受试物溶剂中钙和磷的摄入量处于同一水平，从而排除了饮用水和受试物溶剂中钙和磷的含量不同而造成的差异。
试验过程中，实验大鼠自由摄食，对照组和实验组均饲喂同种基础饲料。对大鼠日摄食量的计算和分析得出，除中剂量熟茶组摄食量显著高于对照组，高剂量绿茶组摄食量显著低于对照组外，其他试验组与对照组相比日摄食量无显著差异，说明普洱茶和绿茶对试验动物的日摄食量无影响；此外，有研究显示，大鼠饲料钙磷比为1.2︰1时，生长期实验大鼠增重及骨骼发育较好[7]，本试验所采用的饲料钙磷比为1.18︰1，接近该比值，能够保证实验动物正常生长发育。
本次试验中，各实验大鼠初始体重与对照组相比无显著差异（P＞0.05），说明各试验动物初始体重处于同一水平；随着灌胃时间的延长，各实验组体重逐渐减轻，灌胃90d后，高剂量普洱生茶、熟茶组和中、高剂量绿茶组大鼠体重显著低于对照组（P0.05），说明高剂量普洱生茶、熟茶和绿茶均具有抑制试验动物体重增加的作用，这与作者前期的研究结果相似[2-3]。
钙、磷及维生素等微量元素是影响骨骼生长发育的重要因素，直接影响到骨重[8]。本研究发现，采用不同剂量的茶汤灌胃90d后，均未出现骨钙和骨磷含量降低的情况，表明饮用普洱茶和绿茶，并未阻碍实验动物对钙、磷的吸收。相反，高剂量生茶和绿茶，以及低、中剂量的熟茶组试验动物骨钙含量显著增加。此外，各茶组试验动物骨磷含量也显著增加。付强等[7]在研究不同钙磷比的饲料对大鼠骨骼生长发育的影响时发现改变饲料中钙磷比能影响大鼠骨骼生长发育，试验大鼠日食饲料能满足其健康要求，而各实验组大鼠摄食量处于同一水平，保证了由饲料带来的钙、磷摄入量无差异。试验结果表明，本批次普洱茶未能降低试验大鼠骨钙和骨磷的含量。秦林林等[9]在研究微量元素锌铜锰的摄入对生长期大鼠骨骼的影响时发现，微量元素在骨代谢过程中可能被整合于骨无机质中而使其正常结构受到影响，但这对骨密度指标无显著性影响。由此推断，高剂量生茶、绿茶组和低、中剂量熟茶组试验动物骨钙含量增加可能是被整合到骨的无机质中，从而表现出上述特点。
骨密度是骨钙代谢中量化骨量的重要指标，也是评价骨量最有说服力的指标之一[10]，它受性激素水平、年龄、膳食结构和身体健康状况等多种因素影响[11-17]，本次试验排除了这些因素的影响，实验结果发现不同剂量、不同茶叶灌胃的试验大鼠的骨密度与对照组之间无显著性差异（P0.05），表明在本试验条件下，采用本批次普洱茶和绿茶对试验大鼠骨密度无影响。
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作者：侯艳1，肖蓉2*，邵宛芳1，周玲1，杨兰兰3，龚江3，杨磊1，王国成1（1.云南农业大学普洱茶学院，云南昆明；2.云南农业大学食品科学技术学院，云南昆明；3.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明）
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